ການກຳນົດປະລິມານກົດອົກຊາລິກໃນໝາກໄມ້ ແລະ ຜັກ ໂດຍການວິເຄາະດ້ວຍໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງແຫຼວປະສິດທິພາບສູງ (HPLC)

ການກຳນົດຂອງ ກົດອັອກຊາລິກ ເນື້ອໃນໃນໝາກໄມ້ ແລະ ຜັກ ໂດຍການວິເຄາະດ້ວຍວິທີໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງແຫຼວປະສິດທິພາບສູງ (HPLC)
1. ຫຼັກການການທົດລອງ ແລະ ການອອກແບບວິທີການ
ໃນຖານະເປັນກົດອິນຊີທົ່ວໄປໃນໝາກໄມ້ ແລະ ຜັກ, ປະລິມານກົດອັອກຊາລິກມີຜົນກະທົບໂດຍກົງຕໍ່ລົດຊາດ ແລະ ຄຸນຄ່າທາງໂພຊະນາການຂອງອາຫານ. ການທົດລອງນີ້ໃຊ້ໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງແຫຼວປະສິດທິພາບສູງແບບປີ້ນກັບກັນ (RP-HPLC). ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂຂອງໄລຍະເຄື່ອນທີ່ເປັນກົດ, ກົດອັອກຊາລິກຈະຖືກແຍກອອກຈາກສານແຊກແຊງໂດຍໃຊ້ຖັນໂຄຣມາໂຕກຣາຟີ C18. ເຄື່ອງກວດຈັບລັງສີອັນຕຣາໄວໂອເລັດທີ່ຕັ້ງໄວ້ທີ່ 210 nm ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການວິເຄາະດ້ານປະລິມານ, ໂດຍອີງໃສ່ລັກສະນະການດູດຊຶມ UV ຂອງກຸ່ມຄາບອກຊິວໃນໂມເລກຸນກົດອັອກຊາລິກ.
2. ການກະກຽມເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ ແລະ ຕົວຢ່າງ
ວິທີການລະລາຍແບບ gradient ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກະກຽມສານລະລາຍມາດຕະຖານ: ຊັ່ງນໍ້າໜັກ 25.0 ມກ ຂອງອາຊິດ oxalic dihydrate ຢ່າງຖືກຕ້ອງ ແລະ ເຈືອຈາງໃຫ້ໄດ້ 25 ມລ ດ້ວຍນໍ້າບໍລິສຸດພິເສດ ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ສານລະລາຍ 1 ມກ/ມລ. ສານລະລາຍນີ້ຖືກລະລາຍຕາມລໍາດັບເປັນຊຸດຂອງສານລະລາຍມາດຕະຖານໃນອັດຕາສ່ວນ 50, 100, 200, 400, ແລະ 800 µg/ມລ, ໂດຍໃຫ້ແຕ່ລະຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຖືກສັກເຂົ້າໄປໃນສາມຊັ້ນ.
ສຳລັບການກະກຽມຕົວຢ່າງ, ການສະກັດດ້ວຍໄມໂຄເວຟແມ່ນໃຊ້: ຊັ່ງນໍ້າໜັກ 5.00 g ຂອງໝາກໄມ້/ຜັກ homogenate, ຕື່ມສານລະລາຍກົດໄຮໂດຣຄລໍຣິກ 0.1 mol/L 10 mL, ປຸງແຕ່ງທີ່ 60°C ດ້ວຍໄມໂຄເວຟເປັນເວລາ 10 ນາທີ, ກັ່ນຕອງຜ່ານຕົວກອງເຍື່ອ 0.45 µm, ແລະເກັບເອົາສານກອງເພື່ອທົດສອບ.
3. ການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງເງື່ອນໄຂໂຄຣມາໂຕກຣາຟີ
ໄລຍະເຄື່ອນທີ່ແມ່ນລະບົບບັຟເຟີໂພແທດຊຽມໄດໄຮໂດຣເຈນຟອສເຟດ 0.01 mol/L (pH 2.5)–ອາເຊໂຕໄນໄຕຣ (95:5), ມີອັດຕາການໄຫຼ 0.8 mL/ນາທີ ແລະ ອຸນຫະພູມຖັນ 35°C. ການປັບອັດຕາສ່ວນອາເຊໂຕໄນໄຕຣສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າເມື່ອໄລຍະອິນຊີເກີນ 10%, ເວລາການຮັກສາຂອງກົດອົກຊາລິກຈະສັ້ນລົງເຫຼືອໜ້ອຍກວ່າ 3 ນາທີ, ແຕ່ການເກີດຈຸດສູງສຸດຈະເກີດຂຶ້ນ. ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດສຸດທ້າຍ, ເວລາການຮັກສາຂອງກົດອົກຊາລິກແມ່ນ 4.2 ນາທີ, ເຊິ່ງບັນລຸການແຍກອອກຈາກກົດຊິຕຣິກ ແລະ ກົດມາລິກທີ່ຢູ່ຕິດກັນຢ່າງສົມບູນ (ຄວາມລະອຽດ > 1.5).
4. ການກວດສອບວິທີການ
ການຢັ້ງຢືນຂອບເຂດເສັ້ນຊື່ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມສຳພັນເສັ້ນຊື່ທີ່ດີລະຫວ່າງພື້ນທີ່ສູງສຸດ ແລະ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໃນລະດັບ 10–1000 µg/mL (R² = 0.9993). ຂີດຈຳກັດຂອງການກວດຈັບ (LOD), ເຊິ່ງກຳນົດໂດຍວິທີການອັດຕາສ່ວນສັນຍານຕໍ່ສຽງລົບກວນ, ແມ່ນ 0.5 µg/mL. ໃນການທົດສອບຄວາມຊ້ຳຊ້ອນ, RSD ສຳລັບການກຳນົດຊ້ຳຊ້ອນຫົກຄັ້ງຂອງຕົວຢ່າງຜັກຫົມດຽວກັນແມ່ນ 1.8%. ການທົດລອງການຟື້ນຕົວຂອງ Spike ໃນສາມລະດັບ (80%, 100%, ແລະ 120%) ໃຫ້ຜົນການຟື້ນຕົວສະເລ່ຍ 98.2%, 102.4%, ແລະ 97.8%, ຕາມລຳດັບ, ຕອບສະໜອງຄວາມຕ້ອງການສຳລັບການວິເຄາະດ້ານປະລິມານ.
5. ການວິເຄາະຕົວຢ່າງຕົວຈິງ
ໄດ້ທົດສອບໝາກໄມ້ ແລະ ຜັກຫົກຊະນິດທີ່ມີຢູ່ໃນທ້ອງຕະຫຼາດຄື: ຜັກຫົມ (356 ± 12 ມກ/100 ກຣາມ), ຜັກຊີ (215 ± 9 ມກ/100 ກຣາມ), ໝາກເລັ່ນ (18 ± 2 ມກ/100 ກຣາມ), ໝາກໂປມ (6 ± 1 ມກ/100 ກຣາມ), ໝາກກ້ວຍ (ບໍ່ພົບ), ແລະ ບຣອກໂຄລີ (89 ± 5 ມກ/100 ກຣາມ). ການປຽບທຽບກັບວິທີມາດຕະຖານແຫ່ງຊາດ (GB 5009.277-2016) ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງສອງວິທີແມ່ນໜ້ອຍກວ່າ 5%, ເຊິ່ງເປັນການຢືນຢັນຄວາມໜ້າເຊື່ອຖືຂອງວິທີການນີ້. ໂດຍສະເພາະ, ວິທີ HPLC ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມອ່ອນໄຫວສູງກວ່າວິທີການໄຕເຕຣດແບບດັ້ງເດີມເມື່ອວິເຄາະຕົວຢ່າງທີ່ມີເນື້ອໃນຕ່ຳ.
6. ໝາຍເຫດສຳຄັນ
ຄວບຄຸມຄ່າ pH ຢ່າງເຂັ້ມງວດໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດຕົວຢ່າງກ່ອນ. ຖ້າຄ່າ pH ຂອງສານສະກັດເກີນ 3, ການຕົກຕະກອນຂອງແຄວຊຽມອັອກຊາເລດຈະນໍາໄປສູ່ຜົນການທົດສອບຕໍ່າ. ຂັ້ນຕອນການເຄື່ອນທີ່ຄວນໄດ້ຮັບການກະກຽມສົດທຸກໆມື້ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຕົກຕະກອນເກືອແລະການອຸດຕັນຂອງຖັນ. ຫຼັງຈາກສັກຢາທຸກໆ 20 ຄັ້ງ, ໃຫ້ລ້າງຖັນດ້ວຍນໍ້າ-ອາເຊໂຕໄນໄຕຣ (30:70) ເປັນເວລາ 30 ນາທີເພື່ອປ້ອງກັນການເສື່ອມສະພາບຂອງປະສິດທິພາບຂອງຖັນ. ສໍາລັບຕົວຢ່າງທີ່ມີເມັດສີ (ເຊັ່ນ: ກະລໍ່າປີສີມ່ວງ), ແນະນໍາໃຫ້ເພີ່ມຂັ້ນຕອນການກັ່ນຕອງການສະກັດແບບແຂງກ່ອນການສັກ.
7. ທິດທາງການນຳໃຊ້ ແລະ ການຂະຫຍາຍ
ວິທີການນີ້ສາມາດຂະຫຍາຍໄປສູ່ການກວດຫາກົດອັອກຊາລິກໃນຕົວຢ່າງທາງຊີວະພາບເຊັ່ນ: ປັດສະວະ ແລະ ເລືອດ. ໂດຍການປັບສ່ວນປະກອບຂອງໄລຍະເຄື່ອນທີ່ (ເຊັ່ນ: ການເພີ່ມ tetrabutylammonium hydroxide), ກົດອັອກຊາລິກ ແລະ ສານເມຕາໂບໄລຕ໌ຂອງມັນສາມາດຖືກກຳນົດໄດ້ພ້ອມໆກັນ. ເມື່ອລວມເຂົ້າກັບເຄື່ອງກວດຈັບມວນສານ, ວິທີການກວດຈັບຮ່ອງຮອຍທີ່ຊັດເຈນກວ່າສາມາດສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນໄດ້. ໃນອຸດສາຫະກຳປຸງແຕ່ງອາຫານ, ວິທີການນີ້ສາມາດໃຫ້ການສະໜັບສະໜູນຂໍ້ມູນທີ່ສຳຄັນສຳລັບການຄັດເລືອກແນວພັນທີ່ມີກົດອັອກຊາລິກຕ່ຳ ແລະ ການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງຂະບວນການປຸງແຕ່ງອາຫານ.